Eesti Huumorimuuseumi tegevuseks on huumoriga seotud esemete kogumine, säilitamine ja eksponeerimine, huumoriõhtute- ja loengute läbiviimine, karikatuuri ja sarži töötubade korraldamine ning kõik muu, mis mahub mõiste huumor alla. Muuseumi huvisfääris on kõik, mis on seotud huumoriga, eeskätt Eesti huumorikultuuriga.

Eesti Huumorimuuseum on suunatud huumorimeelsele inimesele, meid võivad külastada nii üksikisikud kui ka ekskursioonid. Soovi korral on võimalik tellida ka giid koos loenguga "Huumori mõistmisest".